Considere as seguintes condições cromatográficas em HPLC: Coluna de sílica (polar), eluente isocrático
tolueno:diclorometano (70:30, v/v), fluxo de 1 ml/min, detecção por UV/VIS. O cromatograma apresentou 3
picos: Pico 1 Tr=1 mim Pico 2 Tr=3 mim Pico 3 Tr=5 mim
a) Qual dos três compostos deve apresentar menor polaridade?
b) Qual seria a ordem de eluição dos compostos se utilizássemos uma coluna C-18 (apolar)?
c) Se utilizássemos uma mistura de tolueno:diclorometano (60:40, v/v) (tolueno tem maior polaridade do que
o diclorometano) como sistema eluente o que aconteceria com o Tr dos compostos?
Oi,tudo bem? Eu percebi alguns problemas no enunciado do exercício, então vou comentá-los junto com a teoria, okay?
a) Está utilizando no sistema cromatográfico uma Fase normal, ou seja, uma fase estacionária (coluna de sílicar) polar e solvente apolar. Com isso, quanto maior a polaridade da substância analisada, maior a interação dela com a fase estacionária, ficando mais tempo retida. Portanto o pico 3, de maior tempo de retenção, apresenta a maior polaridade, enquanto o pico 1 apresenta menor polaridade por ter sido eluído primeiro.
b) Se mudarmos de fase normal (coluna de sílica) para fase reversa (coluna C18), a ordem de eluição teoricamente será inversa. Vale ressaltar que é necessário também alterar os solventes utilizados, para solventes de maior polaridade como mistura de acetonitrila, álcoois e/ou água. Tolueno e diclorometano são muito apolares para se utilizar com C18, dificilmente uma substância ficará retida nesse sistema.
c) Esse enunciado aqui tem um problema, porque a polaridade e a força de eluição (em sílica) do dicloromentano é maior do que o tolueno. Vou deixar uma referência abaixo, tá?
Snyder, L.R. Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3th ed. Wiley, p 882-883, 2010.
Mas vou ignorar esse fato e explicar dentro do contexto dado, okay? Considerando que manteve a coluna de sílica (polar), se diminuir a concentração do solvente de maior polaridade de 70 para 60, e aumenta o de menor polaridade (30 para 40), a polaridade e a força de eluição do sistema estão diminuindo, com isso as amostras ficarão mais tempo retidas, portanto aumentará o Tr dos picos.
